Diese Fledermausart kann bis zu 12 Jahre alt werden.
Es handelt sich um eine mittelgroße Art mit schmalen Flügeln. Die Oberseite der Zweifarbfledermaus ist hellsilberweiß mit einer schwarzbraunen Haarbasis. Das Gesicht, die kurzen breiten Ohren und die Flughaut sind schwarzbraun. Die Zweifarbfledermaus jagt bevorzugt über Gewässern und deren Uferzonen, Äckern, Wiesen und in Siedlungsbereichen. Als einzige heimische Fledermausart besitzt die Zweifarbfledermaus 2 Milchzitzenpaare.
Diese Art klingt ähnlich wie die Breitflügelfledermaus. Sie ist am besten bei 24-27 kHz zu hören. Sie ruft in einem sehr langsamen und regelmäßigen Rhythmus. Ihre Laute klingen wie: „plob, plob, plob, plob, plob“.